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本试剂盒采用独特的缓冲液系统，特别适合从深加工食品中提取DNA。无需酚/氯仿抽提，使用安全快捷方便，可有效去除深加工食品中的蛋白、脂肪及其他有机化合物等杂质。使用本试剂盒提取的深加工食品DNA可适用于各种检测，包括PCR、荧光定量PCR实验。

由于食品成分复杂，除含有多种原料组分外，还含有盐、糖、油、色素等食品添加剂，此外，加工过程中的煎、炸、煮、烤等工艺也会使原料中的DNA会受到不同程度的损坏。因此，从加工食品中提取DNA比从原材料中提取DNA相对的困难。

• 简单快速：2小时左右（不包括预处理时间）即可获得高质量的DNA。
  
• 纯度高：获得的DNA可直接用于PCR、荧光定量PCR等分子生物学实验。
  
• 得率高：从100mg样品中即可获得足够用于PCR检测的DNA量。

• 更长时间的保存可置于2～8℃，在此条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。
  
• 酱油、番茄酱等样品应进行预处理，以达到好的提取效果。特殊样品请咨询本公司后进行提取。
  
• 如果缓冲液GMO1中出现沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
  
• 所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。

• 样品处理
  针对酱油含有较多焦糖色素、番茄酱pH值过低等不利于DNA提取的特点，在正式进入试剂盒提取之前，应对提取样品进行预处理。
  
  • 酱油样品预处理：
    取酱油30mL，加入60mL无水乙醇混匀，置冰箱（-20℃）放置10min后，10000rpm离心10min。弃上清，在沉淀中加入30mL 0.1M Tris-HCl(pH8.0)溶液，用力摇匀，全部转移至100mL烧杯中，于磁力搅拌器上搅拌2h。分装至1.5mL离心管中，12000rpm离心10min。弃上清，加入1.5mL 0.1M Tris-HCl(pH8.0)溶液，涡旋振荡至块状打散，12000rpm离心10min。弃上清，沉淀中的焦糖色素及盐等小分子已全部去除，可直接用于DNA提取。
    
  • 番茄酱样品预处理：
    取番茄酱液态加工样品1.5mL于离心管中，10000rpm离心15min。弃上清，用1mL 0.1M Tris-HCl溶液洗涤样品3次，振荡混匀，10000rpm离心15min。弃上清，留沉淀待用。
• 提取步骤
  
  • 称取研碎的深加工食品100mg或上述预处理的样品，加500μL缓冲液GMO1和20μL的Proteinase K (20mg/mL)，旋涡振荡1min。
    
  • 56℃孵育1h。孵育过程中每15min振荡一次。
    
  • 加入200μL缓冲液GMO2，充分混匀，涡旋振荡1min，室温静置10min。
    
  • 12000rpm(~13400×g)离心5min，将上清转移至新的离心管中。
    
  • 向上清液中加入0.7倍体积的异丙醇，充分混匀。（例如500μL的水相溶液加350μL异丙醇），12000rpm(~13400×g)离心3min，弃上清，保留沉淀（此步沉淀可能看不见）。
    
    • 加异丙醇沉淀后，弃上清应小心，防止把DNA倒出。
  • 可选步骤：在步骤5加异丙醇之前，向上清液中加入1μL Carrier RNA（酱油、番茄酱必加），再加入异丙醇。
    
  • 加入700μL 70%乙醇，涡旋振荡5sec，12000rpm(~13400×g)离心2min，弃上清。
    
  • 重复操作步骤7。
    
    • 弃上清应小心，防止把DNA倒出。
  • 开盖倒置，室温5～10min，彻底晾干残余的乙醇。
    
    • 乙醇的残留会影响后续的酶反应（PCR、荧光定量PCR等）实验。
  • 加入20～50μL洗脱缓冲液TE，旋涡振荡1min，最终得到DNA溶液。
• DNA提取效果检测
  由于深加工食品中DNA含量非常低，普通琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计等方法都不能很准确的检测，一般用PCR或荧光定量PCR来检测DNA提取效果。如采用我司的2×Taq PCR反应液(货号：WH0095)进行DNA提取效果检测(Lectin基因、Zein基因、Patatin基因检测)：
  
  • 反应体系
    PCR反应体系的建立，20μL体系如下：
    

    成分	用量
    2×Taq PCR反应液	10μL
    引物-F (10μM)	0.5μL
    引物-R (10μM)	0.5μL
    模版	4μL
    ddH2O	5μL

    
    
  • 反应条件：
    

    温度	时间	循环数
    95℃	3min	1
    95℃	30sec	35
    50～65℃	30sec
    72℃	30sec
    72℃	3min	1

    
    
  • 结果检测：
    反应结束后取5～10μL反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。